酶联免疫吸附剂测定法，简称酶联免疫法，或者ELISA法。具体的操作步骤大致分为加样本、温育、洗板、加酶标物、温育、洗板、加显色剂、温育、加终止液、比色读数。当然具体的检验步骤还是严格按照试剂说明书来操作。每一个小步骤出了问题都可能影响整个实验的准确性。所以我们应该注意每一个细节。细节决定成败。下面咱们就来细说一下ELISA实验中需要注意的问题。
一、标本
1、避免溶血；
2、尽量新鲜，避免细菌污染（一般5天内测量的血清可在4℃条件下保存，否则低温保存）。
二、试剂
1、使用前平衡至室温；
2、配置洗板液应该使用去离子水或者蒸馏水，保证水的新鲜。
三、设计实验
1、设计好孔位，通常阴阳对照2个孔，空白对照1孔（必要时做好标注，避免错误）。
四、加样
1、样品应全部加于反应孔底部，避免液体悬挂在孔壁上，并注意不可溅出，不可产生气泡；
2、加样量准确；
3、手工操作时加一下样本时要及时更换吸嘴。
五、温育
1、温度、时间要严格控制；
2、最好使反应杯尽快升高到所需温度；
3、温育常采用的温度有43℃、37℃、室温等。37℃是实验室中常用的保温温度，也是大多数抗原抗体结合的合适温度。
六、洗板
1、使用专用洗涤液，一般洗涤4-6次；
2、若手工洗涤，前两次洗涤都不溢出反应孔，防止污染，后面几次洗涤都应加满反应孔，这样洗涤更干净；
3、每次加洗涤液后应浸泡30秒，再甩去洗液；
4、反应板倒扣吸水纸上拍干。
七、显色与比色
1、空白孔校零，读取各孔OD值；
2、单波长or双波长选择：
a、单波长通常对显色具有最大吸收的450nm或492nm；
b、双波长则是在敏感波长450nm和非敏感波长630nm下各测一次。使用双波长时不用设置空白孔，否则会造成孔吸光度为负数。
了解并有效地避开以上提到的实验雷区，可以大大提高实验的准确性，相信只要用心思考你就会成为最专业的检验师，山东博科酶免为您提供最周到细致的服务，为了人类的美好明天，我们一直在努力！
